동물 / 셀 토탈 RNA 격리 키트를 위한 FAQ

동물 조직/세포 RNA 추출에서 발생할 수 있는 문제에 대한 다음 분석은 실험에 도움이 될 것입니다.또한 작동 지침 및 문제 분석 외에도 다른 실험적 또는 기술적 문제에 대해 전담 기술 지원을 통해 도움을 드립니다.필요한 사항이 있으면 028-83360257 또는 E-mali: Tech@foregene.com으로 문의하십시오.

RNA가 추출되지 않거나 RNA 수율이 낮습니다.

조직 샘플 RNA 함량, 작동 방법, 용출량 등과 같이 회수 효율에 영향을 미치는 다양한 요인이 있는 경우가 많습니다.

1. 작동 중 Ice bath 또는 cryogenic(4 °C) 원심분리를 수행했습니다.

권장 사항: 전 과정에 걸쳐 실온(15-25°C)에서 작동하고 저온에서 ice bath와 원심분리를 하지 마십시오.

2. 부적절한 시료 보존 또는 과도한 시료 보관 시간.

권장 사항: 샘플을 -80°C에 보관하거나 액체 질소에서 동결하고 반복적인 동결-해동 사용을 피하십시오.RNA 추출을 위해 신선한 조직이나 배양된 세포를 사용하십시오.

3. 불충분한 샘플 용해.

권장 사항: 조직을 균질화할 때 조직이 충분히 균질화되고 조직 세포가 RNA 방출을 설명할 수 있을 정도로 충분히 분할되었는지 확인하십시오.

4. 용리액이 제대로 첨가되지 않았습니다.

권장 사항: RNase-Free ddH2O가 정제 컬럼 멤브레인의 중앙에 한 방울씩 추가되었는지 확인합니다.

5. 버퍼 RL2 또는 버퍼 RW2에 정확한 부피의 무수 에탄올이 추가되지 않았습니다.

권장 사항: 지침을 따르고 정확한 양의 무수 에탄올을 완충액 RL2 및 완충액 RW2에 추가하고 키트를 사용하기 전에 잘 혼합하십시오.

6. 조직 샘플의 투여량이 적절하지 않습니다.

권장 사항: 10-20 mg의 조직 또는 500 μl 버퍼 RL1당 (1-5) × 106 세포를 사용하십시오. 과도한 조직 사용은 RNA 추출을 감소시킬 수 있기 때문입니다.

7. 부적절한 elution volume 또는 불완전한 elution.

권장 사항: 정제 컬럼의 용출 부피는 50-200 μl입니다.용출 효과가 만족스럽지 않으면 예열된 RNase-Free ddH2O를 추가한 후 5-10분 동안 실온 배치 시간을 연장하는 것이 좋습니다.

8. Buffer RW2 세척 후 정제 컬럼에 에탄올 잔류물이 있습니다.

권장 사항: Buffer RW2 세척, 1분 동안 빈 튜브 원심 분리 후 에탄올 잔류물이 있는 경우 빈 튜브 원심 분리 작업 시간을 2분으로 늘리거나 정제 컬럼을 실온에서 5분 동안 두어 잔류물을 적절히 제거할 수 있습니다. 에탄올.

정제된 RNA가 분해됨

정제된 RNA의 품질은 시료의 보존, RNase 오염, 조작 등과 같은 요인과 관련이 있습니다.

1. 조직 샘플을 제때 보관하지 않습니다.

권장 사항: 수집 후 조직 샘플이나 세포를 적시에 사용하지 않으면 즉시 -80°C 또는 액체 질소에서 냉동 보관하십시오.RNA를 추출하려면 가능한 한 새로 채취한 조직이나 세포 샘플을 사용하십시오.

2. 조직 샘플의 반복적인 동결-해동.

권장 사항: 조직 샘플을 보관할 때 보존을 위해 작은 조각으로 자르는 것이 가장 좋으며, 샘플의 반복적인 동결 해동 및 RNA의 분해를 방지하기 위해 사용할 때 조각 중 하나를 제거하는 것이 가장 좋습니다.

3. 수술 중 RNase가 도입되거나 일회용 장갑, 마스크 등을 착용하지 않습니다.

권장 사항: RNA 추출 실험은 별도의 RNA 조작실에서 가장 잘 수행되며 실험 전에 테이블을 정리합니다.

RNase의 도입으로 인한 RNA 분해를 최소화하기 위해 실험 중 일회용 장갑과 마스크를 착용하십시오.

4. 시약은 사용 중 RNase에 오염됩니다.

권장 사항: 관련 실험을 위해 새 Animal Total RNA Isolation Kit로 교체하십시오.

5. RNA 조작에 사용되는 원심분리기 튜브, 팁 등은 RNase에 오염되어 있습니다.

권장 사항: RNA 추출에 사용되는 원심분리기 튜브, 팁, 피펫 등이 모두 RNase가 없는지 확인합니다.

정제된 RNA는 다운스트림 실험에 영향을 미칩니다.

정제 컬럼에 의해 정제된 RNA, 염 이온, 단백질 함량이 너무 크면 역전사, Northern Blot et al.

1. 용출된 RNA에는 염 이온 잔기가 있습니다.

권장 사항: 올바른 양의 에탄올이 버퍼 RW2에 추가되었는지 확인하고 작동에 표시된 원심 속도로 2회 정제 컬럼 세척을 수행합니다.염 이온 잔류물이 있는 경우 정제 컬럼을 Buffer RW2에 실온에서 5분 동안 두고 원심분리를 수행하여 염 오염 제거를 최대화합니다.

2. 용출된 RNA의 에탄올 잔류물.

권장 사항: 버퍼 RW2 세척 후 작동에 표시된 원심 분리 속도로 빈 튜브 원심 분리 작업을 수행하는지 확인하고 여전히 에탄올 잔류물이 있는 경우 빈 튜브 원심 분리 작업 시간을 2분으로 늘리거나 실온에서 5분 동안 그대로 두십시오. 에탄올 잔류물의 제거를 최대화하기 위해 빈 튜브 원심분리 후 분.