RT-QPCR 에아사이트텀 택맨 단일 스텝 실시간 RT-PCR 마스터 믹스

RT-큐피크레 에아사이트텀 (단일 스텝) -택맨

상보DNA, 정제된 DNA가 실시간 PCR에 대해 사용합니다

제품 소개

포레게네 단단계 RT-PCR 쉽 시리즈품은 RNA에서부터 이중 쇄 dna까지 통합된 반응을 실현합니다 즉, 역전사와 PCR 증폭이 똑같은 반응 원심 분리관과 똑같은 반응 시스템에 완료됩니다, 그러므로 단순화된 실험적 단계와 최적화된 실험 계획과 실험의 효율이 나아졌습니다.

포레게네 핫스타 타크 dna 폴리머라제, 큐피크레 체제가 빨리 그리고 특히 캔으로 만든 최적화된 택맨을 사용하는 RT-큐피크레 에아사이트텀 (단일 스텝) -택맨은 추적 RNA 템플릿의 실시간 RT-큐피크레 정량적 검출을 수행합니다.

수송과 저장 조건

• 수송 조건 : 전체 과정은 장비가 상태에 있는 보증하기 위한 저온 냉장 용기로 수송됩니다 <4>
• 저장 조건 : 장비는 -20C에 저장됩니다. 영수증 뒤에 바로 제품을 -20C에 있는 일정온도 냉동기에 저장하세요. 만약 저장 조건이 적절하면, 제품이 1년 유효기간 동안 어떠한 성능도 떨어뜨리지 않을 것입니다.

키트 부속 정보

• 2× RT-큐피크레 에아사이트텀 혼합 택맨 : 포레게네 역전사 효소와 rnase 저해제, 포레게네 핫스타 타크 dna 폴리머라제, 드트프스의 최적화된 비율, Mg2+, 안정기, 개선제와 최적화기.
• 록스 참고 염료 : PCR 샘플 로딩 에러에 의해 초래된 PCR 튜브 중의 차이를 조정하기 위해, 일반적으로 ABI, 스트라타진, 기타 등등과 같은 회사의 실시간 PCR 열 순환기에 쓰였습니다. 다른 악기에 의해 요구된 록스 참고 염료의 집중은 다르고 사용자가 기구의 적용농도에 따라 그것을 추가할 수 있습니다.

예방책 :

Ｕ 시약은 반복 프리징과 해동을 회피하여야 합니다, 그렇지 않았다면 시약의 성능이 감소하거나 무효이게 될 것입니다.

Ｕ 장비에서 시약이 빛으로부터 보호되어야 하고, -20' Ｃ에 저장했습니다.

Ｕ 그것이 새로운 샘플 추출을 사용한다고 추천받거나 주형 rna가 -80' Ｃ에 저장했습니다 (RNA가 반복 프리징과 해동을 회피하여야 합니다).

RNA 가수분해효소 오염물을 피하기 위한 Ｕ는 미안하지만, 실험을 rnase-프리 우주에서 수행합니다 ; 사용된 피벳 팁과 PCR 튜브는 있어야 합니다 rnase-프리 ; 그리고 일회용 장갑과 마스크를 착용하세요.

Ｕ 이 장비가 실험을 위한 특이성 프라이머와 함께 사용되어야 합니다. 실험의 필요에 따라 확대될 유전자를 위해 특이성 프라이머를 선택하세요.

사용 전에 Ｕ가 완전히 녹고, 홱 움직이고 사용하기 전에 다른 사람들과 친하게 지내기 위해 2× RT-큐피크레 에아사이트텀 믹스-타크만에 제동을 걸었습니다 ; 시스템을 준비는 장비의 성능을 개선하고 PCR 증폭을 증가시키기 위해 얼음 조에 운영되어야 합니다.

주형 rna 집중

RT-큐피크레 에아사이트텀 (단일 스텝) -택맨 :(1 pg-100 NG (좋지않다) 전 rna) /20 μl 시스템.

오퍼레이션 가이드

한 :재료와 시약을 준비

• 준비가 되어 있는 RNA 템플릿 (그것이 RNA를 추출하고 정화하기 위해 포레게네 전 rna 격리 키트 시리즈 장비를 사용한다고 추천받습니다), 특이성 프라이머 (10 μM)와 관련된 소비재의와 악기로 준비합니다.

기록 : RNA의 완전성을 보증하고 새로운 샘플로부터 추출된 RNA를 사용하려고 하세요.

• 그것이 자연스럽게 녹게 하고, 사용까지 섞기 위한 튜브 벽을 튀기기 위한 풋옵션 2× RT-큐피크레 에아사이트텀 믹스-타크만과 rnase-프리 ddH2O와 (필요한 경우) 얼음에서 20× 록스 참고 염료.

비 :RT-큐피크레 시스템 준비

2× RT-큐피크레 에아사이트텀 믹스-타크만은 사용하도록 편리하고 빠르고, 운영 동안 오염을 회피하고 실험 오차가 최대 범위에 반응 시스템을 다수 준비에 의해 발생되었습니다. 사용할 때, 오직 반응 시스템의 절반의 량만을 (예를 들면, 반응 시스템이 20 μl이면, 10 μl 2× RT-큐피크레 에아사이트텀 믹스-타크만 해결책을 가지고 가세요), 량을 구성하기 위해 RNA 템플릿과 특이성 프라이머의 적절한 양을 추가하고, rnase-프리 ddH2O를 추가하세요. 특별한 RT-큐피크레 반응 시스템 준비는 테이블 1 아래를 언급할 수 있습니다.

표 1 : RT-큐피크레 시스템 준비

기록 : 전향 프라이머와 역방향 프라이머는 타겟 유전자를 위한 특이성 프라이머입니다. 큐피크레 시스템은 실험의 필요와 PCR 모델에 따라 조정될 수 있습니다. 대부분의 프라이머의 최종 농도를 위해, 우리는 400nM을 권고합니다. 우리의 추천된 최종 농도에 따라 준비가 되어 있는 집중에 따라 특이성 프라이머와 탐침의 적정량을 조정하세요. 50μl과 큐피크레를 위해 시스템은 비례하여 시약의 액수를 조정하기 위해 미안하지만, 20μl 시스템을 언급합니다.

1* : 다른 양적 PCR 기구에 따라 록스 참고 염료의 적절한 최종 농도를 선택하세요. 공통 양적 PCR 기계를 위한 록스 참고 염료의 최적 농도는 다음 표에 나타납니다 :

Ｃ :RT-큐피크레 반응 시스템 설정

• 위에서 말한 테이블과 관련하여 RT-큐피크레 시스템으로 준비한 후, 점잖게 혼합되세요 (당신이 점잖게 피펫으로 계량하기 위한 피벳 팁을 사용할 수 있습니다 ; 당신은 튜브 벽 또는 튜브 캡위에 흩뿌려진 액체를 수집하고, 나중에 사용할 수 있도록 냉장 용기에 제한을 가하기 위해) 또한 간략하게 vortexer와 원심분리기에 혼합될 수 있습니다.
• 반응의 온도와 시간에서 설정하기 위해 RT-큐피크레 반응 프로그램 설치 (표 2)를 언급하세요.

기록 : 2× RT-큐피크레 에아사이트텀 믹스-타크만의 활동을 보증하고 증폭 효율을 향상시키기 위해, 반응 프로그램이 시스템 준비가 완료되는 후에 바로 들어가게 될 수 있도록, PCR 기구 프로그램을 구축한 후 RT-큐피크레 반응 시스템으로 준비하는 것은 최고입니다.

• 최고 큐피크레 영향을 얻기 위해, 경사진 PCR는 다른 템플릿과 다른 프라이머에 대하여 반응 조건을 최적화하는데 사용될 수 있습니다.

기록 : 이 장비에 제공된 포레게네 핫스타 타크 dna 폴리머라제의 확대 온도 범위는 다음과 같습니다 : 60-72C와 최고 확장 온도는 72C입니다.

다음은 RT-큐피크레 반응 조건의 사례입니다. 그것은 PCR 반응을 위한 2단계 건너뛰기법을 이용한다고 추천받습니다. 템플릿 농도가 비특이적 증폭을 야기시키기에 너무 낮을 때, 낮은 프라이머 Tm 가치는 낮은 증폭 효율 또는 가난한 증폭 곡선 반복성, 기타 등등으로 이어집니다, 그것이 PCR 반응을 위한 3 단계 방법을 시도한다고 추천받습니다. RT-큐피크레 반응 조건의 설정을 위해 표 2-1 (2단계 건너뛰기법)과 표 2-2 (3 단계 방법)을 언급하세요.

표 2-1 : RT-큐피크레 반응 프로그램 설치 (2단계 건너뛰기법)

표 2-2 : RT-큐피크레 반응 프로그램 설치 (3 단계 방법)

1* : 역전사 시간은 실험의 필요에 따라 조정될 수 있습니다. β-액틴과 같은 일반적 내생성 유전자들은 단지 10 분이 필요합니다 ; 특별한 압착 유전자들을 발견하기 위해, 역전사 시간은 적절하게 필요에 따라 확장될 수 있습니다.

2* : 증폭된 타겟 단편의 길이에 따라 특정 시간을 지세요. 포레게네 핫스타 타크 dna 폴리머라제의 증폭 속도는 2kb/min 입니다

기록 : PCR 반응 조건은 복잡한 이차구조와 RNA 템플릿을 위해 템플릿, 프라이머, 기타 등등의 구조적인 조건에 따라 다릅니다, 그것이 역전사의 첫 번째 단계를 위해 42C를 사용한다고 추천받습니다. 특정 동작에, 연장 시간 어닐링 온도를 포함하는, 타겟 단편의 몸집, 증폭된 프래그먼트의 기본 시퀀스와 프라이머의 GC함량과 키, 기타 등등과 같은 구체 정황에 따라 최적 반응 조건을 설계하는 것은 필요합니다.

워크플로우 :