RT-QPCR 에아사이트텀 (단일 스텝) -택맨 Cat.No.RT-02131/02132 단단계 실시간 RT-PCR 마스터 믹스

Cat.No.RT-02131/02132

단단계 실시간 RT-PCR 마스터 믹스

RT-PCR 에아사이트텀 I (단일 스텝)

Cat.No.RT-02011/02012

단단계 RT-PCR 마스터 믹스

단지 연구 용도를 위해

-20C에 저장하세요

제품 소개

포레게네 단단계 RT-PCR 에아사이트텀 시리즈품은 RNA에서부터 이중 쇄 dna까지 통합된 반응을 실현합니다 즉, 역전사와 PCR 증폭이 실험적 단계를 단순화하는 똑같은 반응 원심 분리관과 똑같은 반응 시스템에 완료되고, 실험 프로그램을 최적화하고, 실험 효율성을 향상시킵니다.

포레게네 핫스타 타크 dna 폴리머라제, 큐피크레 체제가 빨리 그리고 특히 캔으로 만든 최적화된 택맨을 사용하는 RT-큐피크레 에아사이트텀 (단일 스텝) -택맨은 추적 RNA 템플릿의 실시간 RT-큐피크레 정량적 검출을 수행합니다.

특징

- 단단계 장비는 역전사와 PCR가 똑같은 튜브에서 실행되고 단지 주형 rna, 특별한 PCR 프라이머와 rnase-프리 ddH2O를 추가할 필요가 있을 수 있게 합니다.

- 실시간 바이러스의 RNA 또는 추적 RNA의 정량 분석은 빨리 그리고 정확하게 실행될 수 있습니다.

- 장비는 유일한 포레게네 역전사 반응제를 사용하고 포레게네 핫스타 타크 dna 폴리머라제가 효과적으로 반응의 증폭 효율과 전문성을 향상시키기 위해 유일한 반응 시스템과 결합했습니다.

- 최적화된 반응 시스템은 반응이 더 높은 검출 감도와 더 강한 열 안정성과 더 좋은 허용한도를 가지고 있게 합니다.

- RT-큐피크레 에아사이트텀 (단일 스텝) -택맨 장비는 신호를 제거하기 위한 사용되 편리한인 웰 사이의 에러의 뒷받침하고 신호를 보낸다는 것을 있을 수 있는 록스 내부 기준 염료가 딸려 있습니다 양적 PCR 기구의 다른 모델들에 사용하기 위한 최종 사용자들

제품 품질의 관리

FOREGEN의 전체 품질 경영 시스템 (FOREGENE의 토탈 품질 관리 시스템)에 따르면, RT-PCR 에아사이트텀 I (단일 스텝) 장비의 각각 뱃치는 시험된 타임즈 엄밀하게 각각 장비의 품질, 신뢰성과 안정이 1회분으로 처리한다는 것을 보증할 것입니다 .

키트 콘텐츠

수송과 저장 조건

1.수송 조건

저온 냉장 용기 교통부의 전체 과정, 장비가 보기 흉한 꼴을 하고 있다는 것을 보증하고의 <4>

2. 저장 조건

RT 에아사이트텀 내가 -20' Ｃ에 저장됩니다. 영수증 뒤에 바로 제품을 -20' Ｃ에 있는 일정온도 냉동기에 저장하세요. 만약 저장 조건이 적절하면, 제품이 1년 유효기간 동안 어떠한 성능도 떨어뜨리지 않을 것입니다.

키트 부속 정보

2× RT-PCR 에아사이트텀은 혼합됩니다 :포레게네 역전사 효소, rnase 저해제, 포레게네 핫스타 타크 DNA Polymerase,dNTPs, Mg2+, 반응 버퍼, 최적화기와 안정기, 기타 등등.

예방책 : (장비를 사용하기 전에 주의깊게 예방책을 읽으세요)

템플릿을 위해, 그것은 새로운 샘플로부터 추출된 RNA를 사용하도록 추천되거나 -80C에 저장됩니다 (RNA가 반복 프리징과 해동을 회피하여야 합니다).

RNA 가수분해효소 오염물을 회피하기 위해, 실험 작전은 rnase-프리 우주에서 실행되어야 합니다 ; 사용된 피벳 팁과 PCR 원심 분리관은 있어야 합니다 rnase-프리 ; 그리고 일회용 장갑과 마스크는 입혀져야 합니다. 사용 전에 완전히 녹고, 홱 움직이고 사용하기 전에 다른 사람들과 친하게 지내기 위해 2×RT-PCR 에아사이트텀 혼합에 제동을 거세요 ; 시스템을 준비는 장비의 성능과 PCR 증폭의 전문성을 개선하기 위해 얼음 조에 운영되어야 합니다.

주형 rna 집중

RT-PCR 에아사이트텀 I (단일 스텝) :(0.1pg-1μg 전 rna) /20μl 시스템

장비 애플리케이션

- 이 장비는 고-카피와 저카피 유전자들의 고속 검출을 위해 사용됩니다.

- 그것은 특히 높은 GC함량 또는 복잡한 이차구조와 RNA 템플릿의 고속 검출에 적합합니다.

제품 품질의 관리

FOREGEN의 전체 품질 경영 시스템 (FOREGENE의 토탈 품질 관리 시스템)에 따르면, RT-PCR 에아사이트텀 I (단일 스텝) 장비의 각각 뱃치는 시험된 타임즈 엄밀하게 각각 장비의 품질, 신뢰성과 안정이 1회분으로 처리한다는 것을 보증할 것입니다 .

오퍼레이션 가이드

한 : 재료와 시약을 준비

1. 준비가 되어 있는 RNA 템플릿 (그것이 RNA를 추출하고 정화하기 위해 포레게네 전 rna 격리 키트 시리즈 장비를 사용한다고 추천받습니다), 특이성 프라이머 (10μM)와 관련된 소비재의와 악기로 준비합니다.

기록 : RNA의 완전성을 보증하고 새로운 샘플로부터 추출된 RNA를 사용하려고 하세요.

2. 그것이 자연스럽게 녹게 하기 위해 2× RT-PCR 에아사이트텀 혼합과 rnase-프리 ddH2O를 얼음 조에 두고, 나중에 사용할 수 있도록 다른 사람들과 친하게 지내기 위해 튜브 벽을 튀기세요.

비 : RT-PCR 시스템 준비

2×RT-PCR 에아사이트텀 혼합은 최대 범위에 반응 시스템을 다수 준비에 의해 초래된 운영과 실험 오차 동안 오염을 회피하면서, 사용하도록 편리하고 빠릅니다. 사용할 때, 오직 반응 시스템의 절반의 량만을 (예를 들면, 반응 시스템이 20μl이면, 10μl 2×RT-PCR 에아사이트텀 혼합 용액을 가지고 가세요), 량을 구성하기 위해 RNA 템플릿과 특이성 프라이머의 적절한 양을 추가하고, rnase-프리 ddH2O를 추가하세요. 특별한 RT-PCR 반응 시스템 준비를 위해 테이블 1 아래를 언급하세요.

형식 1 :RT-PCR 시스템 준비

1* : 보통 프라이머의 최종 농도는 더 좋은 결과를 획득하기 위해 0.2-0.25μM입니다. 반응 성능이 가난할 때, 프라이머 농도는 0.1-0.5μM의 사정 거리 안에 조정될 수 있습니다.

기록 : 전향 프라이머와 역방향 프라이머는 타겟 유전자를 위한 특이성 프라이머입니다 ; 50μl 시스템은 비례하여 시약 적정량을 조정하기 위해 미안하지만, 20μl 시스템을 언급합니다.

Ｃ : RT-PCR 반응 프로그램 설치

• 위에서 말한 테이블과 관련하여 RT-PCR 시스템으로 준비한 후, 점잖게 혼합되세요 (당신이 점잖게 불기 위해 피벳 팁을 사용할 수 있습니다 ; 당신은 튜브 벽 또는 튜브 캡위에 흩뿌려진 액체를 수집하고, 나중에 사용할 수 있도록 냉장 용기에 제한을 가하기 위해) 또한 간략하게 vortexer와 원심분리기에 혼합될 수 있습니다.

2. 반응의 온도와 시간에서 설정하기 위해 RT-PCR 반응 프로그램 설치 (표 2)를 언급하세요.

기록 : 2×RT-PCR 에아사이트텀 혼합의 활동을 보증하고 증폭 효율을 향상시키기 위해, 반응 프로그램이 시스템이 준비되는 후에 바로 들어가게 될 수 있도록, PCR 기구 프로그램을 설정한 후 RT-PCR 반응 시스템으로 준비하는 것은 최고입니다.

형식 2 :RT-PCR 반응 시스템 설정

기록 : 참조로서 위에서 말한 절차는 참조로서 뿐입니다. 실제 반응 조건은 복잡한 이차구조와 RNA 템플릿을 위해 템플릿, 프라이머, 기타 등등의 구조적인 조건에 따라 다릅니다, 역전사의 첫 번째 단계를 위한 반응 온도가 50' Ｃ라고 추천받습니다. 특정 동작에, 목표물 프래그먼트 사이즈의 구체 정황과 증폭된 프래그먼트의 기본 시퀀스와 프라이머의 GC함량과 키에 따라 어닐링 온도, 연장 시간, 기타 등등을 포함하여 최적 반응 조건을 설계하는 것이 필요합니다.
RT-PCR 동작도

포레게네 역전사 효소

포레게네 역전사 효소는 대단히 효율적이고 특별한 역전사 반응을 제공할 수 있습니다. 역전사 효소는 고친화도를 나타내고, 여전히 좋은 역전사 활동을 50' Ｃ의 반응 온도로 유지합니다. 그것은 잘 역으로 돌려질 수 있고 다른 역전사 효소가 취급할 수 없는 복잡한 이차구조와 RNA를 전사합니다. 포레게네 역전사 효소는 고감도를 가지고 있고, RNA 양 (0.1pg≤RNA≤1μg)의 넓은 범위에서 적용 가능합니다.

포레게네 핫스타 타크 dna 폴리머라제

PCR의 대단히 특정한 증폭을 제공합니다. 역전사가 진행 중일 때, dna 폴리머라제는 완전히 쓸모 없고, 반대 전사 반응을 저지하지 않습니다. 94' Ｃ로 가열하는 PCR 반응 프로그램 뒤에, dna 폴리머라제는 활성화되고 역전사 효소가 비활성화시킵니다. 높은 전문성과 PCR 증폭의 신뢰성을 보증하면서, 핫 스타트 과정은.

주의 :(장비를 사용하기 전에 주의깊게 예방책을 읽으세요)

- 리에이전트스는 반복 프리징과 해동을 회피하여야 합니다, 그렇지 않았다면 시약의 성능이 감소하거나 무효이게 될 것입니다.

- 그것은 -80C에 저장한 새로운 샘플 추출 또는 주형 rna를 사용한다고 추천받습니다 (RNA가 반복 프리징과 해동을 회피하여야 합니다).

- RNA 가수분해효소 오염물을 회피하기 위해, 실험 작전은 rnase-프리 우주에서 실행되어야 합니다 ; 사용된 피벳 팁과 PCR 튜브는 있어야 합니다 rnase-프리 ; 그리고 일회용 장갑과 마스크는 입혀져야 합니다.

- 이 장비는 실험을 위해 특이성 프라이머와 함께 사용되어야 합니다. 실험의 필요에 따라 확대될 유전자를 위해 특이성 프라이머를 선택하세요.

- 사용 전에 완전히 녹고, 홱 움직이고 사용하기 전에 다른 사람들과 친하게 지내기 위해 2× RT-PCR 에아사이트텀 혼합에 제동을 걸었습니다 ; 시스템을 준비는 장비의 성능과 PCR 증폭의 전문성을 개선하기 위해 얼음 조에 운영되어야 합니다 .

- 얼음 조

자기 준비 시약

- RNA 템플릿

- 유전자 특성 PCR 프라이머

안전성

       - 이 제품은 단지 사용이 미안하지만, 의약품, 임상 의학, 식품과 화장품에서 그것을 사용하지 않는다는 과학적 연구를 위한 것입니다.

       - 화학 제품을 사용할 때 적당한 실험실 옷, 장갑, 보안경, 기타 등등을 입습니다.

부정적인 제어는 또한 높은 형광값을 가집니다

1. 작동 동안 야기된 시약 오염물.

권고 : RT-PCR 실험을 위한 새로운 시약으로 대체하세요.

2. 오염은 PCR 반응 시스템을 준비하는 동안 발생했습니다. 권고 : 다음과 같은 운영 동안 필요한 보호 대책을 취하세요 : 라텍스 장갑을 입으면서, 필터, 기타 등등과 피벳 팁을 사용하기.

3. 프라이머는 떨어뜨려지고 프라이머의 퇴보가 비특이적 증폭으로 이어질 것입니다.

제안 : 프라이머가 떨어뜨려지는지 발견하기 위한 SDS-PAGE 전기영동을 사용하고, 그들을 RT-PCR 실험을 위한 새로운 프라이머로 대체하세요.

정량 값의 가난한 반복성

1. 기구는 기능 이상입니다.

제안 : 온도 관리 또는 탐지 동안 부족한 재현성의 결과를 초래한 PCR 기계의 각각 PCR 홀 사이에 실수가 있을 수 있습니다.

상응하는 기구의 교육에 따라 테스트를 수행하세요.

2. 샘플 순도는 좋지 않습니다.

권고 : 불순 샘플은 템플릿과 프라이머의 순도를 포함하는 실험의 부족한 재현성을 이르게 할 것입니다. 템플릿을 재순화하는 것은 최고이고 프라이머가 가장 잘 SDS-PAGE에 의해 정화됩니다.

3. PCR 시스템 준비와 저장 시간은 너무 깁니다.

제안 : 준비 뒤에 바로 PCR 실험을 위한 RT-PCR 시스템을 사용하고, 너무 오랫 동안 그것을 남기지 마세요 ; 그것은 RT-PCR 시스템 준비를 계속하기 전에 PCR 프로그램을 구축한다고 추천받습니다.

4. PCR 증폭 조건은 적당하지 않고 프라이머 시퀀스 또는 집중이 부적당합니다.

제안 : 프라이머 시퀀스와 프라이머의 정확성이 떨어뜨려지지 않는다는 것을 확인하세요 ; 증폭 신호가 좋지 않을 때, 어닐링 온도를 조정하고 적절하게 프라이머 농도를 조정하려고 하세요.